ⅠNюклейн хүчилiтанилцуулга
Нуклейн хүчил нь дезоксирибонуклеины хүчил (ДНХ) ба рибонуклеины хүчил (РНХ) гэж хуваагддаг бөгөөд тэдгээрийн дотор РНХ нь рибосомын РНХ (рРНХ), элч РНХ (мРНХ) болон дамжуулагч РНХ (тРНХ) гэж өөр өөр функцээр хуваагддаг.ДНХ нь голчлон цөм, митохондри, хлороформд төвлөрдөг бол РНХ нь цитоплазмд голчлон тархдаг.Генийн илэрхийлэлийн материаллаг үндэс болох нуклейн хүчлийн олборлолт нь молекул биологийн судалгаа, эмнэлзүйн молекулын оношлогоонд маш чухал үүрэг гүйцэтгэдэг.Нуклейн хүчлийн олборлолтын концентрац, цэвэр байдал нь дараагийн ПГУ, дараалал, векторын бүтэц, ферментийн задрал болон бусад туршилтуудад шууд нөлөөлнө.
Ⅱ Нуклейн хүчлийн олборлолт, цэвэршүүлэх арга
① Фенол/хлороформ олборлох арга
Фенол/хлороформын экстракци нь ДНХ-г ялгах сонгодог арга бөгөөд дээжийг боловсруулахдаа ихэвчлэн хоёр өөр органик уусгагчийг ашигладаг бөгөөд ДНХ дээр суурилсан нуклейн хүчлийг усны үе шатанд уусгаж, органик фаз дахь липидийг, хоёр фазын хооронд уургийг уусгадаг.Энэ арга нь хямд өртөгтэй, өндөр цэвэршилттэй, сайн нөлөө үзүүлдэг давуу талтай.Сул тал нь нарийн төвөгтэй ажиллагаа, урт хугацаа юм.
② Тризолын арга
Тризолын арга нь РНХ ялгах сонгодог арга юм.Тризолын аргыг хлороформоор центрифугийн дараа усан фаз ба органик фаз гэж хуваадаг бөгөөд РНХ нь усан үе шатанд уусч, усан фазыг шинэ EP хоолой руу шилжүүлж, изопропанол нэмсний дараа хур тунадас авч, дараа нь этилийн спиртээр цэвэршүүлдэг.Энэ арга нь амьтны эд, эс, бактераас РНХ гаргаж авахад тохиромжтой.
③ Төвөөс зугтах баганыг цэвэрлэх арга
Центрифугийн баганыг цэвэршүүлэх арга нь тусгай цахиурын матриц шингээх материалаар дамжуулан ДНХ-г шингээж чаддаг бол РНХ болон уураг нь саадгүй дамждаг ба дараа нь нуклейн хүчлийг ялгах, цэвэршүүлэхийн тулд өндөр давс бага PH, бага давстай өндөр РН-ийн агууламжтай элюцийг хослуулан хэрэглэнэ.Давуу тал нь цэвэршүүлэх өндөр концентраци, өндөр тогтвортой байдал, органик уусгагч шаардлагагүй, хямд өртөг юм.Сул тал нь үүнийг алхам алхмаар, илүү олон үйл ажиллагааны үе шаттайгаар центрифуг хийх шаардлагатай байдаг.
④ Соронзон бөмбөлгүүдийг арга
Соронзон бөмбөлгүүдийн арга нь эсийн эд эсийн дээжийг лизатаар хувааж, дээж дэх нуклейн хүчлийг ялгаруулж, дараа нь нуклейн хүчлийн молекулуудыг соронзон ирмэгийн гадаргуу дээр тусгайлан шингээж, уураг, элсэн чихэр зэрэг хольцыг дотор нь үлдээдэг. шингэн.Эсийн эдийг хуваах, соронзон ирмэгийг нуклейн хүчилтэй холбох, нуклейн хүчлээр угаах, нуклейн хүчлээр ялгаруулах гэх мэт үе шатуудаар эцэст нь цэвэр нуклейн хүчлийг олж авдаг.Давуу тал нь шаталсан центрифуг хийх шаардлагагүй, энгийн ажиллагаа, богино хугацаанд ашиглах явдал юм.Энэ нь техникийн шаардлага багатай бөгөөд автомат болон массын ажиллагааг гүйцэтгэх боломжтой.Соронзон ирмэг ба нуклейн хүчлийн өвөрмөц хослол нь гаргаж авсан нуклейн хүчлийг өндөр концентрацитай, цэвэршилттэй болгодог.Сул тал нь одоогийн зах зээлийн үнэ харьцангуй өндөр байна.
⑤ Бусад аргууд
Дээрх дөрвөн аргаас гадна буцалгах хагарал, өтгөрүүлсэн давсны арга, анионик угаалгын нунтаг арга, хэт авианы арга, ферментийн арга гэх мэт.
Ⅲ Нуклейн хүчлийн олборлолтын төрөл
Foregene нь дэлхийд тэргүүлэгч Шууд ПГУ-ын платформ, хоёр баганатай РНХ тусгаарлах платформтой (зөвхөн ДНХ + зөвхөн РНХ).Гол бүтээгдэхүүнд ДНХ/РНХ тусгаарлах иж бүрдэл, ПГУ, Шууд ПГУ-ын молекулын лабораторийн урвалжууд орно.
① Нийт РНХ олборлолт
Нийт РНХ-ийн задралын дээжинд цус, эс, амьтны эд, ургамал, вирус гэх мэт орно. Нийт РНХ-ийн олборлолтоор өндөр цэвэршилттэй, өндөр концентрацитай нийт РНХ-ийг авах боломжтой бөгөөд үүнийг RT-PCR, чип шинжилгээ, in vitro орчуулга, молекулын клонжуулалт, Dot Blot болон бусад туршилтууд.
Гадаадтай холбоотойРНХ тусгаарлах иж бүрдэл
Амьтны нийт РНХ тусгаарлах хэрэгсэл--Төрөл бүрийн амьтны эд эсээс өндөр цэвэршилттэй, өндөр чанартай нийт РНХ-ийг хурдан бөгөөд үр дүнтэй гаргаж авна.
Эсийн нийт РНХ тусгаарлах хэрэгсэл--Төрөл бүрийн өсгөвөрлөсөн эсээс 11 минутын дотор өндөр цэвэршүүлсэн, өндөр чанартай нийт РНХ авах боломжтой.
Ургамлын нийт РНХ тусгаарлах хэрэгсэл--Полисахарид, полифенолын агууламж багатай ургамлын дээжээс өндөр чанарын нийт РНХ-г хурдан гаргаж авна.
Вирусын РНХ тусгаарлах хэрэгсэл--Цусны сийвэн, ийлдэс, эсгүй биеийн шингэн, эсийн өсгөвөрийн супернатант зэрэг дээжээс вирусын РНХ-ийг хурдан тусгаарлаж, цэвэршүүлнэ.
② Геномын ДНХ олборлолт
Геномын ДНХ-ийн задралын дээжинд хөрс, ялгадас, цус, эс, амьтны эд, ургамал, вирус гэх мэт орно. Геномын ДНХ-ийн хандыг ферментийн задрал, ДНХ-ийн номын сан байгуулах, ПГУ, эсрэгбие бэлтгэх, Western blot эрлийзжүүлэх шинжилгээ, генийн чип, өндөр -хүрэлтийн дараалал болон бусад туршилтууд.
Гадаадтай холбоотойДНХ тусгаарлах иж бүрдэл
Амьтны эдийн ДНХ тусгаарлах хэрэгсэл--Амьтны эд, эс гэх мэт олон эх сурвалжаас геномын ДНХ-ийг хурдан гаргаж авах, цэвэршүүлэх.
Цусны ДНХ-ийн Миди иж бүрдэл (1-5мл)--Цусны бүлэгнэлтийн эсрэг үйлчилгээтэй цуснаас (1-5мл) өндөр чанарын геномын ДНХ-г хурдан цэвэрлэнэ.
Хөхний арчдас/FTA карт ДНХ тусгаарлах хэрэгсэл--Хүүсний арчдас/FTA картын дээжээс өндөр чанарын геномын ДНХ-г хурдан цэвэршүүлнэ.
Ургамлын ДНХ тусгаарлах хэрэгсэл--Ургамлын дээжээс (полисахарид ба полифенол ургамлын дээжийг оруулаад) өндөр чанарын геномын ДНХ-г хурдан цэвэрлэж, олж авна.
③ Плазмид олборлолт
Плазмид нь ДНХ-ийн рекомбинацын нийтлэг зөөвөрлөгч болох эсийн доторх дугуй хэлбэртэй жижиг молекул ДНХ юм.Плазмид олборлох арга нь РНХ-ийг зайлуулж, бактерийн геномын ДНХ-ээс плазмидыг салгаж, уураг болон бусад хольцыг зайлуулж, харьцангуй цэвэр плазмидыг авах явдал юм.
Ерөнхий плазмидын мини хэрэгсэл--Хувиргах, ферментийн задрал зэрэг молекул биологийн ердийн туршилтуудад зориулж хувирсан бактериас өндөр чанартай плазмидын ДНХ-ийг хурдан цэвэршүүлнэ.
④ Бусад олборлолтын төрөл, миРНХ олборлолт гэх мэт.
Амьтны miRNA тусгаарлах хэрэгсэл--Амьтны төрөл бүрийн эд, эсээс 20-200 нт миРНХ, сиРНХ, снРНХ-ийн жижиг РНХ-ийн хэсгүүдийг хурдан бөгөөд үр дүнтэй гаргаж авах
Ⅳ Нуклейн хүчлийг гаргаж авах, цэвэршүүлэх үр дүнд тавигдах шаардлагаs
① Нуклейн хүчлийн анхдагч бүтцийн бүрэн бүтэн байдлыг хангах.
② Уураг, сахар, липид болон бусад макромолекулуудын интерференцийг бууруулна.
③ Нуклейн хүчлийн дээжинд ферментийг дарангуйлдаг органик уусгагч эсвэл өндөр концентрацитай металл ион байх ёсгүй.
④ ДНХ-г задлахдаа РНХ болон бусад нуклейн хүчлийн бохирдлыг арилгах хэрэгтэй ба эсрэгээр.
Шуудангийн цаг: 2022 оны 11-р сарын 24-ний өдөр
